Dvije metode za cijepanje peptida iz smola čvrste-faze

čvrsta faza Fmoc Nakon kemijske sintetizacije peptida, postoje mnoge metode cijepanja. Sada ćemo predstaviti dvije osnovne vrste koje svi obično koriste.

Stavite suhu smolu u tikvicu za mućkanje i dodajte odgovarajuću količinu sredstva za čišćenje (Scavengers) Reagensa za cijepanje trifluoroctene kiseline (TFA), 10-25 ml/g smole, poklopite i povremeno protresite na sobnoj temperaturi. Filtrirajte smolu s novom TFA. Isperite smolu 2-3 puta, pomiješajte filtrat i kap po kap dodajte 8-10 puta veći volumen ledenog etera. Ponekad se dio može ispariti s TFA. Dobiven je sirovi talog peptida. Dietil eter se može ohladiti ledom kako bi se poboljšala učinkovitost taloženja. Na kraju, sakupite precipitirani sirovi peptid.

Primjenjiva smola:king resin ili Rink Amide Resin

1% TFA:

će 1 g Polipeptid-viseća smola je dodana u otopinu koja sadrži 1% TFA. Staklena tikvica za mućkanje otopine diklorometana je zatvorena i mućkana 2 minute. Upotrijebite dušik da izlijete filtrat u novu tikvicu za mućkanje s metanolom koja sadrži 10% piridina. Ponovite gornju operaciju 10 puta. Upotrijebite 30 ml DCM, 30 ml MeOH. Isperite preostale zaštićene peptide na smoli tri puta uzastopce. TLC ili HPLC Provjerite ostatke čišćenja. Pomiješajte sav filtrat i isparite otapalo pod smanjenim tlakom da ostane 5% volumena. dodajte 40 ml vode i smjesu-ohladite ledom kako biste pomogli taloženje. Nakon filtracije, proizvod isperite čistom vodom tri puta i stavite ga u kutiju za vakuumsko sušenje za upotrebu. KOH ili P2O5 Ostavite da se osuši.

razrijeđena octena kiselina:

koristite AcOH/TFE/DCM (2:2:6) Tretirajte peptide koji vise na smoli otopinom za rezanje 2 sata, filtrirajte smolu i tri puta isperite smolu otopinom za rezanje. Dodajte 15-struki volumen n-heksana u miješani filtrat i rotacijski isparite kako biste uklonili višak octene kiseline. Metode obnavljanja peptida detaljno su navedene u nastavku.

Primjenjiva smola:2- CTC smola